Медицинское заключение НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН о применении ректальных суппозиториев «Корилип»

Авторы: Руководитель лаборатории цитохимии, Доктор биологических наук Петричук С.В.; Главный научный сотрудник Доктор медицинских наук, профессор Шищенко В.М.


Цивилизованность человека предполагает бережное отношение к своим предкам и своему потомству, поскольку лишь в рамках культурной преемственности возможно поддержание и тем более развитие сложных технологий. Это подтверждается всей историей человечества. Сейчас совместными усилиями всего населения в рамках существующего экономического уклада готовится состояние здоровья человека на ближайшие годы, обозримых в прогнозах де­сятилетий, что может составить основу стратегического подхода к обеспечению страхования материнства и детства.

В последние годы на фоне резкого снижения рождаемости в Москве отмечается существенное нарастание частоты перинаталь­ной патологии (в 1,5-2 раза), стабилизация частоты и рождения не­доношенных детей (7-9%). Наблюдается определенный патоморфоззаболеваний периода новорожденности, патогенетически связанный с ухудшением состояния здоровья матерей: большинство заболева­ний у детей характеризуется полисистемными нарушениями, нейро-соматическими расстройствами, протекающими на фоне значитель­но сниженной резистентности в репаративном периоде таких заболеваний, как перинатальная энцефалопатия, сепсис, пневмония, респираторный дистресс-синдром и т.д.. У большинства детей отмечаются стойкие нарушения функций различных органов исистем, развивается синдром дизадаптации (синдром повышенной возбудимости, дизбактериоз, дискенезия желудочно-кишечного тракта, аллергические реакции, затяжное и рецидивирующее течеиие ОРВИ.

У 70-95% новорожденных с клинически выраженной патоло­гией доказано наличие врождённой энтеровирусной инфекции, что связано с вертикальной передачей вирусов, т.е. с заражением плода от матери с хронической формой соответствующей инфекции. Срывадаптации материнского организма к эндогенной вирусной инфекции при вертикальной передаче вируса является основным условием осложнённого течения беременности и относительно тяжёлого тече­ния внутриутробной инфекции.

При моделировании хронической Коксаки вирусной инфек­ции и вертикальной передачи вируса на мышах была подтверждена этиологическая связь депрессии ферментов аэробного дыхания в лимфоцитах периферической крови с вирусной инфекцией. Приме­нение соответствующего комплекса препаратов (кофакторов и субстратов цикла Кребса) у самок с хронической инфекцией сопровож­далось повышением активности дегидрогеназ сукцината, альфа-глицерофосфата, глутамата в лимфоцитах периферической крови и тканях внутренних органов; одновременным достоверным снижени­ем активности накопления вируса в организме самок и их плодов. В связи с тем, что одним из ведущих звеньев патогенеза хронической Коксаки вирусной инфекции является индуцированная вирусом гистологическая гипоксия, нами было проведено изучение противовирусной активности в эксперименте и клиническое испытание препаратов метаболического действия с разными вариантами введения (внутримышечно, в виде таблеток и порошков, в виде ректальныхсуппозиториев).

Всё вышесказанное определило одно из направлений работы лаборатории цитохимии совместно с рядом клинических отделений НИИ педиатрии НЦЗД РАМН и других медицинских учреждений г.Москвы: коррекция ферментного статуса клеток крови, отражаю­щего функциональное состояние внутренних органов и организма в целом, кофакторами и субстратами у пациентов разного возраста.

В течение последних 18 лет в НИИ педиатрии РАМН прово­дятся исследования по применению кофакторов и субстратов раз­личных метаболических циклов в лечении детей; проведены клини­ческие испытания двух метаболических комплексов, которые былипредставлены в виде ректальных суппозиториев «Корилип».

Суппозиторий «Корилип» содержит:

  • кокарбоксилазу,
  • рибофлавин (витамин В2),
  • липоевую кислоту.

Все продукты питания в организме расщепляются до ацетил-КоА (аминокислоты - до кетоглутарата, сукцината, фумарата и окса-лоацетата), который вступает в конечный путь окисления - в цикл трикарбоновых кислот. Оптимизировать деятельность ферментных систем цикла Кребса можно разными путями, в частности, введени­ем субстратов или кофакторов.

Активация цикла ди- и трикарбоновых кислот возможна также путем регуляции двух важных этапов: 1) окисления пировиноградной кислоты до ацетил-КоА и затем взаимодействия с оксалоацетатом до образования лимонной кислоты; 2) окисления кетоглутаровой кислоты до сукцината (янтарной кислоты). Оба эти этапа катализируются полиферментными комплексами в состав которых входит липоевая кислота.

Кокарбоксилазаявляется коферментом ферментов, участвующих в процессах углеводного обмена, катализирует карбоксилирование и декарбоксилирование ос-кетокислот. Рибофлавинмоно-нуклеотид (ФМН) представляет собой готовую форму кофермента, образующуюся в организме из рибофлавина(В2) путем фосфорилирования. ФМН является предшественником одного из основных переносчиков электронов - флавинадениннуклеотида. ФМН входит в состав активного центра флавиндегидрогеназ, в частности сукцината и а-глицерофосфата.

Комплекс «Корилип» показан в случаях понижения активно­сти флавопротеидов (в более выраженной форме - это проявление хронической тканевой гипоксии), деформации клеточного распределения в сторону преобладания клеток с низкой активностью, низким клеточным разнообразием и пр.

Суппозитории «Корилип» апробировались в клинико-диагностическом центре и лаборатории цитохимии НИИ педиатрии НЦЗД РАМН. Исследования проводились совместно с Центром акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, с Московскимпротивогерпетическим центром, с 25-м роддомом.

Состав суппозиториев разработан совместными усилиями со­трудниками лаборатории цитохимии института под руководством профессора Нарциссова Р.П. и сотрудниками НИИ фармации под руководством канд. фарм. наук Г.С.Киселёвой и Л.В. Сологуб. Со­став суппозиториев был определён на основании изменений ферментативной активности в клетках периферической крови и внутренних органов.

Основная задача данного исследования - оценка эффективности применения суппозиториев «Корилип» у пациентов разного воз­раста была решена с использованием ряда функциональных, биохи­мических, цитохимических и математико-статистических методовисследования.

 

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Испытание превентивной эффективности суппозиториев про­водилось у 64 женщин группы риска и у их детей, наблюдавшихся на протяжении года после рождения. Суппозитории применялись на фоне базисной терапии и у 31 женщины во время беременности подобязательным контролем цитохимического анализа (Цитохимическая экспертиза). Только базисную (общепринятую) терапию полу­чали 33 женщины группы сравнения.

Назначение и контроль за эффективностью суппозиториев «Корилип» осуществлялся с помощью количественного цитохими­ческого анализа. Ферментный статус лимфоцитов периферической крови исследовали в классическом варианте постановки реакции (Р.П.Нарциссов, 1969-1984), включающем определение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и глицерофосфатдегидрогеназы (ГФДГ), а также в различных модификациях классического вариан­та, позволяющих оценить проницаемость мембран и устойчивость локуса митохондрий, содержащего сукцинатдегидрогеназу. Прони­цаемость мембраны митохондрий опосредованно оценивали по ак­тивности СДГ после 10 мин. инкубации. Исходили из того, что скорость образования продукта реакции при выявлении активности СДГ максимальна в первые минуты экспозиции и минимальна при времени экспозиции 60 минут.

Этот метод позволил определять не только среднюю активность фермента, как это делается в биохимических исследованиях, но позволил рассматривать в качестве характеристик параметры распределения клеток по активности фермента - коэффициенты второго, третьего и четвертого порядка (коэффициенты вариации, асимметрии, эксцесса), а также меру клеточного разнообразия (относительную энтропию информации). Совокупность этих параметров распределения по активности фермента и составляет понятие ферментного статуса клеток крови. Не всегда реакцию клеток крови на внешние воздействия удается выявить по изменению средней активности фермента, гораздо чаще изменения затрагивают какую-то часть популяции клеток, что отражается в статистических парамет­рах распределения. Наиболее часто клеткой, с которой работает клинический цитохимик, является лимфоцит.

Анализ клеточной популяции позволяет выявить изменения различных клеточных субпопуляций на фоне еще не измененной средней активности. Эти изменения клеточной структуры появляются рань­ше клинических признаков заболевания (рис.1).

В разгар острого заболевания наблюдается, как правило, небольшая активация всей клеточной популяции лейкоцитов, которая при затяжном течении переходит в депрессию.

В периоде выздоровления или ремиссии при нормализации клинических показателей мы часто наблюдаем отклонения в фер­ментном статусе, что свидетельствует о неполном выздоровлении на уровне клеточной популяции.
график

Рис. 1. Стадии реакции клеточной популяции лимфоцитов в процессе развития заболевания.

Для оценки функциональной активности митохондрий исполь­зовали цитоморфоденситометрический метод определения активности СДГ на анализаторе изображения фирмы «Диаморф». (Р.П.Нарциссов, 1998; С.В.Петричук и соав. 2001). Анализатор изо­бражения клетки помимо подсчета числа гранул формазана - продукта цитохимической реакции - в каждой клетке позволяет определить их геометрические и оптические параметры (рис.1). При определении активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) - фермента, локализованного на внутренней мембране митохондрий и отражающего функциональную активность митохондрий, геометрические размеры гранул (площадь, периметр) представляют собой размеры ми­тохондрий, а оптическая плотность - интенсивность ферментной реакции. Метод позволяет оценить функциональную активность отдельно лежащих митохондрий и митохондрий, объединенных в конгломераты (кластеры).

 

При патологическом процессе в первую очередь изменения за­трагивают отдельно лежащие митохондрии, у которых сначала из­меняется их площадь, а затем оптическая плотность. Более тяжелые патологические состояния приводят к уменьшению функциональнойактивности как отдельно лежащих гранул, так и кластеров.

 

Анализ функциональной активности митохондрий на основецитоморфоденситометрических параметров позволяет выявить особенности течения патологического процесса на субклеточном уров­не и оценить эффективность любого проводимого лечения.

 

РЕЗУЛЬТАТЫ

 

Важное значение применение препаратов энергонормализирующего действия имеет у женщин, готовящихся к беременности и у беременных. Этот подход следует рассматривать как метаболическое пособие, по ассоциации с акушерским пособием.

 

Различные эксперименты на животных доказали положительный эффект от применения препаратов, входящих в энергонормализирующий комплекс «Корилип». Так, например, введение их на фо­не физиологического течения беременности выявило не только отсутствие эмбриотоксического и тератогенного эффекта, но и их положительное действие: ни одного погибшего помета в опытной группе (против 20% в контрольной) на фоне в два раза большего количества плодов. Результаты других экспериментов свидетельствовали о защитном эффекте метаболической коррекции к действию микробного фактора, способствующим устойчивости потомства мышей при введении беременным самкам стафилококковой культуры.

 

Метаболическое пособие в виде комплекса «Корилип» необходимо назначать всем женщинам, особенно женщинам группы высокого риска развития перинатальной патологии у детей.

 

В группу риска входят женщины с отягощенным акушерским анамнезом в виде повторных выкидышей, мертворождений, беспло­дия и хронических воспалительных заболеваний придатков; женщи­ны с хроническими соматическими заболеваниями, часто болеющиеОРВИ, имеющие высокую эмоциональную и физическую нагрузку. Перечисленная патология в значительной степени определяет и ис­ходные (до приема препаратов) цитохимические показатели. У этих женщин, как правило, наблюдается снижение активности СДГ и а-ГФДГ на фоне деформации структуры популяции в виде сниженно­го количества лимфоцитов с типичной активностью (эксцесс меньше -0,8), преобладанием в популяции клеток с низкой активностью (асимметрия меньше - 0,8). Женщинам группы риска показано назначение комплекса «Корилип» как в качестве самостоятельного лечения, так и в комплексе со специализированной терапией.

 

Выбор продолжительности курсов (10 дней) объясняется тем, что через 4-5 дней после начала приема препаратов наблюдается по­ложительная динамика в цитохимическом статусе лейкоцитов, за­ключающаяся, в частности, в увеличении средней активности СДГ исс-ГФДГ и тенденции к нормализации остальных элементов струк­туры популяции. Количество назначаемых курсов определяется по­ложительной динамикой цитохимических показателей и стабильно­стью их изменений. Как правило, необходимо не менее 6-8 курсовкомплексом «Корилип» для нормализации показателей ферментного статуса и самочувствия женщины (рис. 2)

график

Рис. 2. Положительная динамика активности сукцинатдегидроге-назы лимфоцитов у женщин группы риска после 6 курсов терапии ком­плексом «Корилип»

Для исследования степени напряжения энергетического мета­болизма в ответ на введение комплекса суппозиториев «Корилип» нами использовалась модификация цитохимического анализа — про­ба с добавлением к основному субстрату модулятора активности СДГ - изолимонной кислоты (проба с изоцитратом, СДГ(ИЗО)) [М.Н.Кондрашова и соав., 1987, Петричук СВ. и соав., 1990]. Из­вестно, что в ответ на действие интенсивного внешнего раздражите­ля происходит резкое повышение выработки энергетических ресур­сов в клетках организма, идущих на обеспечение ответной реакции. Для предотвращения чрезмерного расходования субстратов энерге­тического цикла и истощения митохондриальной активности суще­ствует защитный механизм блокирования основного митохондриального фермента - сукцинатдегидрогеназы. Данный блок инакти-вируется при проведении реакции по выявлению активности СДГ с добавлением изолимонной кислоты к основному субстрату.
Повышение активности фермента в пробе с изолимонной ки­слотой, по сравнению с пробой на основном субстрате свидетельст­вует о напряжении энергетического метаболизма.
Для оценки степени напряжения энергетического метаболизма вычисляется коэффициент К:
К=СДГ(ИЗО)/СДГ=1,15 или 115%

Значение коэффициента «К»>1 является неблагоприятным цитохимическим признаком, свидетельствует о напряжении клеточно­го метаболизма и о нестабильности митохондриальной мембраны. У условно здоровых пациентов значение коэффициента «К» составляет 80 - 90 %.

В процессе лечения суппозиториями «Корилип» значение ко­эффициента «К» уменьшается и приближается к нормальным значе­ниям.

Таблица 1.

Изменения цитохимических параметров у женщин группы риска, получавших «Корилип» (п=26)

таблица

* Изменения достоверны, РО.05

Эффективность метаболической коррекции можно оценить с двух сторон. Во-первых, сравнением течения и исхода беременности в двух группах женщин - получавших и не получавших метаболическое посо­бие. Во-вторых, оценкой исхода беременности и развитием детей на первом году жизни в зависимости от сроков, в которые была начата ме­таболическая коррекция женщинам группы риска.

Выявлено, что у беременных женщин группы риска (п=31), полу­чавших курсовое лечение комплексом «Корилип» на фоне базисной те­рапии, частота осложнений беременности повторными ОРВИ во 2 и 3 триместрах была в 2,5 раза ниже по сравнению с неполучавшими (п=33). У них реже отмечались обострения хронических очагов инфек­ции. Гипохромная анемия у беременных, получавших метаболическую коррекцию, диагностирована в 2,9 раза реже, чем в группе сравнения.

Клинические признаки морфо-функциональной незрелости среди доношенных детей (выраженное лануго, гипорефлексия, слабый крик, пастозность и отечность подкожно-жировой клетчатки, податливость костей черепа, увеличенные размеры большого родничка) наблюдались у 23,1% детей, получавших комплекс «Корилип», и 42,5% детей - не по­лучавших ее. В свою очередь, среди женшин, которым проведено не ме­нее 6-8 курсов, клинические признаки морфофункциональной незрело­сти отмечались почти в 2 раза реже по сравнению с получившими ее 1 -3 раза.

У женщин, получавших метаболическое пособие за 3-9 месяцев до беременности, наблюдалась стабилизация месячного цикла с наличием четко выраженной двухфазности, меньшей болезненности менструации. Все женщины родили живых доношенных детей (на 39-40-ой неделе) с весом 2800,0-3900,0, оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов, неонатальныйпериод у них протекал без осложнений. На первом году дети практически не болели. К 1 году нервно-психическое развитие у них было нор­мальным и соответствовало 28-30 баллам по таблице Л.Т.Журба.

Основные рекомендации по применению препаратного ком­плекса «Корилип» у женщин состоят в следующем:

  • наиболее эффективное по отношению к ребенку применениепрепаратов-метаболитов наблюдается у женщин, получающих терапию за 6-9 месяцев до и в течение беременности под контролем цитохимического анализа. Раннее применение препарата обеспечивает более высокий уровень энергетики тканей и клеток беременной женщины (плаценты, тканей плода), новорожденных и грудных детей, сведение к минимуму перинатальных осложнений, лучшему развитию детей на первом году
    жизни.

  • продолжительность курсов терапии комплексом «Корилип» (10дней) и их кратность определяется показателями активности ферментов лейкоцитов периферической крови.

  • в течение беременности необходимо назначение метаболического пособия в критические периоды (по цитохимическием показателям): 5-8 недель, 10-12 недель, 20 неделя, 27-28 недель, 30-32 неделя, 35-37 недель.

Подготовка супружеской пары к беременности должна начинать­ся не менее чем за 6-9 месяцев до беременности, в оптимальном варианте год жизни родителей до зачатья должен быть отнесен к онтогенезу ребенка.
 

Литература :

 

  1. Кондрашова М.Н. Метаболические состояния митохондрий при разных физиологических состояниях организма // Молекулярные механизмы и регуляция экспериментального обмена. - Пущино, 1987.-с. 140-153.

  2. Кондрашова М.Н., Григоренко Е.В., Бабский А.М. Гомеостазирование физиологических функций на уровне митохондрий // Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза.- Новосибирск: Наука, 1987,- с. 40-66.

  3. Коноплева Т.Н., Лозовская Л.С, Сидельникова В.М., ШищенкоВ.М., Морозова Н.А., Бомбардирова Е.П., Зубкова И.В., Королькова Е.Л., Петричук СВ., Духова З.Н. Профилактика внутриутробных вирусных инфекций и связанной с ними патологииплода и ребенка » НЦЗД РАМН, НЦ АГиП РАМН, Москва, Россия. Материалы IX съезда педиатров России: «Детское здравоохранение России: Стратегия развития» М., 2001, стр.290.

  4. Лукьянова Л.Д. Особенности работы дыхательной цепи в условиях кислородной недостаточности // Молекулярные механизмы и регуляция энергетического обмена. - Пущино, 1987.- с. 153-161

  5. Мухамедова Х.Т. Эффективность метаболической терапии приинфекционно- воспалительных заболеваниях недоношенных детей: Автореф. дисс....канд. мед. наук. - М., 1988.-23с.

  6. Нарциссов Р.П. Анализ изображения клетки - следующий этап развития клинической цитохимии в педиатрии. // Педиатрия, 1998.-№4.-С. 101-105.

  7. Нарциссов Р.П. и др. Здоровье, болезнь и лекарство (цитохимическая экспертиза с помощью анализатора изображений). - М.,1999.-25 с.

  8. Петричук СВ., Шищенко В.М., Духова З.Н. Цитоморфометри-ческая характеристика лимфоцитов у здоровых и больных детей Т Москва,, Россия, Материалы IX съезда педиатров России; «Детское здравоохранение России: Стратегия развития» М., 2001, стр.449.

  9. Петричук СВ., Шищенко В.М., Духова З.Н. Цитоморфометриче-ский метод в оценке функциональной активности митохондрий лимфоцитов в норме и при патологии. // В сб.: «Митохондрии в патологии». Пущино, 2001. - С. 19-20

  10. Ю.Усманов У.Х., Киселева Г.С, Цейтина А.Я., Шищенко В.М., Ва-люлис А. Создание и исследование детских суппозиториев с витаминами группы В // Фармацея.- М., 1991.- № 1.-е.20-24.